{"id":21,"date":"2021-07-08T16:33:14","date_gmt":"2021-07-08T14:33:14","guid":{"rendered":"http:\/\/crmw.fr\/?page_id=21"},"modified":"2021-07-08T16:33:14","modified_gmt":"2021-07-08T14:33:14","slug":"etude-en-biologie-moleculaire","status":"publish","type":"page","link":"https:\/\/crmw.fr\/?page_id=21","title":{"rendered":"Biologie mol\u00e9culaire"},"content":{"rendered":"\n

Le VWF est synth\u00e9tis\u00e9 par un g\u00e8ne pr\u00e9sent sur le bras court du chromosome 12 (le bras p13.3 du chromosome 12). Le g\u00e8ne, de grande taille, comprend ~180 kb d\u2019ADN et comporte 52 exons. Il est exclusivement exprim\u00e9 dans deux types cellulaires : les cellules endoth\u00e9liales et les m\u00e9gacaryocytes.<\/p>\n\n\n\n

Cette s\u00e9quence est en partie r\u00e9pliqu\u00e9e sous la forme d\u2019un pseudog\u00e8ne VWFP1 port\u00e9 par le chromosome 22 (exons 23 \u00e0 34)<\/p>\n\n\n\n

Le produit primaire du g\u00e8ne est synth\u00e9tis\u00e9 dans les cellules endoth\u00e9liales et les m\u00e9gacaryocytes, pr\u00e9curseurs des plaquettes, sous forme d\u2019un pr\u00e9-pro-polypeptide de 2813 acides amin\u00e9s qui comporte un peptide signal de 22 acides amin\u00e9s, un propeptide de 741 acides amin\u00e9s et une sous-unit\u00e9 mature de 2050 acides amin\u00e9s.<\/p>\n\n\n\n

La structure primaire de cette prot\u00e9ine est constitu\u00e9e d\u2019une r\u00e9p\u00e9tition de quatre types de domaines (A, C, D et CK) dans l\u2019ordre suivant (Fig. 1) : D1, D2, D\u2019, D3, A1, A2, A3, C1, C2,C3, C4, C5, C6, CK).<\/p>\n\n\n\n

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La recherche des anomalies mol\u00e9culaires constitue l\u2019\u00e9tape finale de confirmation du type de MW, en compl\u00e9ment de l\u2019analyse ph\u00e9notypique, mais elle trouve \u00e9galement son utilit\u00e9 dans le diagnostic pr\u00e9natal (pour les couples susceptibles d\u2019avoir un enfant atteint de MW de type 3, souvent d\u00e9j\u00e0 parents d\u2019un enfant atteint d\u2019une forme s\u00e9v\u00e8re chez qui les anomalies g\u00e9niques ont \u00e9t\u00e9 identifi\u00e9es). Elle est principalement r\u00e9alis\u00e9e actuellement en France par deux laboratoires experts, \u00e0 Nantes et \u00e0 Lille, sous l\u2019\u00e9gide du CRMW qui corr\u00e8le ph\u00e9notype et g\u00e9notype. La strat\u00e9gie actuelle consiste, chez les patients r\u00e9pondant aux crit\u00e8res diagnostiques du CRMW, \u00e0 s\u00e9quencer par la technique de Sanger l\u2019ADN g\u00e9nomique de l\u2019exon 28, qui porte environ 40 % des mutations d\u00e9crites, puis l\u2019ADN de l\u2019exon 26, qui ne peut \u00eatre discrimin\u00e9 de son pseudog\u00e8ne en s\u00e9quen\u00e7age \u00e0 haut d\u00e9bit ou NGS (next generation sequencing). En dernier lieu, s\u2019il n\u2019y a pas de mutations sur ces deux exons, on r\u00e9alise l\u2019analyse par NGS des 50 exons restants, compl\u00e9t\u00e9e \u00e9ventuellement par une recherche en MLPA (multiplex ligation-dependent probe amplification) des variants d\u00e9l\u00e9t\u00e8res non visibles en NGS (grandes d\u00e9l\u00e9tions, insertions ou duplications). La classification des variants mol\u00e9culaires reste du domaine de sp\u00e9cialistes. Elle peut n\u00e9cessiter l\u2019analyse in silico des variants identifi\u00e9s, car la distinction de certains variants non pathog\u00e8nes avec un type 1 de MW est difficile, en raison de la grande variabilit\u00e9 du g\u00e8ne VWF chez les sujets sains.<\/p>\n\n\n\n

La liste des mutations, r\u00e9guli\u00e8rement actualis\u00e9e, est disponible sur les sites de l\u2019Universit\u00e9 de Sheffield pour l\u2019ISTH et sur le site de l\u2019EAHAD (European Association for Haemophilia and Allied Disorders).<\/p>\n\n\n\n

Cette \u00e9tude g\u00e9notypique peut \u00eatre men\u00e9e apr\u00e8s ph\u00e9notypage dans le cadre d\u2019une \u00e9tude familiale, afin d\u2019adapter le conseil g\u00e9n\u00e9tique en cas de situation particuli\u00e8re (n\u00e9omutations, disomie uniparentale, s\u00e9gr\u00e9gations atypiques).<\/p>\n\n\n\n

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